四嗪基團是逆電子需求Diels–Alder反應(yīng)(IEDDA)的關(guān)鍵反應(yīng)位點,能夠與應(yīng)變烯烴如反式環(huán)辛烯(TCO)或環(huán)戊二烯等快速且特異性地反應(yīng),無需催化劑且在生物條件下溫和進行。該反應(yīng)是生物正交點擊化學的重要成員,廣泛應(yīng)用于體內(nèi)外生物大分子標記、活細胞成像和藥物遞送系統(tǒng)構(gòu)建。
Alexa Fluor 488 Tetrazine利用四嗪-TCO的高速反應(yīng)特性,能實現(xiàn)快速、選擇性和無毒性的分子偶聯(lián)。應(yīng)用包括標記攜帶TCO的蛋白質(zhì)、抗體、核酸和納米材料,實現(xiàn)活體跟蹤和靶向成像。其綠色熒光適合與遠紅色或藍色染料共用,實現(xiàn)多重熒光共定位分析。
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