TRITC-Dextran 四甲基羅丹明異硫氰酸酯標(biāo)記葡聚糖
一、基本信息
中文名稱:四甲基羅丹明異硫氰酸酯標(biāo)記葡聚糖
英文名稱:Tetramethylrhodamine isothiocyanate-Dextran,簡稱 TRITC-Dextran
別稱:TRITC 標(biāo)記葡聚糖
二、熒光特性
激發(fā)與發(fā)射波長
TRITC-Dextran 的激發(fā)波長通常在 547 - 556nm 左右,發(fā)射波長大約在 572 - 578nm,呈現(xiàn)出明亮的橙紅色熒光。這種熒光波長范圍使其在常見的熒光顯微鏡系統(tǒng)中易于檢測和成像,并且與許多其他熒光染料的波長有較好的區(qū)分度,便于多色熒光成像實(shí)驗(yàn)。
熒光量子產(chǎn)率與穩(wěn)定性
熒光量子產(chǎn)率:TRITC 本身具有較高的熒光量子產(chǎn)率,標(biāo)記到葡聚糖上后,TRITC-Dextran 仍能保持較好的熒光發(fā)射性能。在合適的激發(fā)條件下,能夠產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光信號,有利于在低濃度樣品中進(jìn)行檢測。
穩(wěn)定性:TRITC-Dextran 的熒光穩(wěn)定性受多種因素影響。在避光、低溫(一般 4℃以下)且干燥的環(huán)境中儲存時(shí),其熒光強(qiáng)度能夠保持相對穩(wěn)定。然而,它對光照、高溫、氧化以及某些化學(xué)物質(zhì)較為敏感。長時(shí)間暴露在強(qiáng)光下,會發(fā)生光漂白現(xiàn)象,熒光強(qiáng)度逐漸降低。同時(shí),pH 值的變化也可能影響其熒光穩(wěn)定性,在極端 pH 環(huán)境下,熒光強(qiáng)度可能會下降。
三、物理化學(xué)屬性
外觀:一般為橙紅色固體粉末或溶液,顏色深淺會受到分子量大小、TRITC 標(biāo)記程度以及溶液濃度的影響。高濃度溶液顏色更深,呈現(xiàn)出鮮艷的橙紅色;低濃度溶液顏色相對較淺。
溶解性
水溶性:TRITC-Dextran 具有良好的水溶性,能夠迅速溶解在水中形成均勻的溶液,便于在生物實(shí)驗(yàn)中直接加入到細(xì)胞培養(yǎng)基或生物樣品中進(jìn)行標(biāo)記和成像。
有機(jī)溶劑溶解性:也可溶于一些極性有機(jī)溶劑,如二甲基亞砜(DMSO)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)等,但在非極性有機(jī)溶劑中的溶解性較差。
分子量范圍:葡聚糖本身有多種分子量規(guī)格,常見的 TRITC-Dextran 分子量范圍從幾千道爾頓到幾百萬道爾頓不等。不同分子量的 TRITC-Dextran 在溶液中的黏度、擴(kuò)散速度等物理性質(zhì)不同,小分子量擴(kuò)散快,適合研究細(xì)胞內(nèi)動態(tài)過程;大分子量循環(huán)時(shí)間長,適用于研究體內(nèi)分布和代謝。
三、應(yīng)用領(lǐng)域
(一)生物成像
細(xì)胞成像
細(xì)胞內(nèi)吞與分泌研究:將 TRITC-Dextran 加入細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)中,細(xì)胞可通過內(nèi)吞作用將其攝入。通過熒光顯微鏡觀察其在細(xì)胞內(nèi)的分布和動態(tài)變化,可研究細(xì)胞內(nèi)吞和分泌的機(jī)制。例如,觀察 TRITC-Dextran 在細(xì)胞內(nèi)的運(yùn)輸路徑,了解細(xì)胞內(nèi)囊泡運(yùn)輸?shù)倪^程。
組織成像
組織切片染色:可用于組織切片的熒光染色,標(biāo)記特定組織結(jié)構(gòu)或細(xì)胞類型。例如,在研究腫瘤組織時(shí),TRITC-Dextran 可以標(biāo)記腫瘤組織的血管網(wǎng)絡(luò),幫助分析腫瘤的血供特點(diǎn)和生長狀態(tài)。
活體組織成像:在小動物淺表組織成像中,TRITC-Dextran 的熒光信號可用于觀察組織微循環(huán)和病變區(qū)域的代謝變化。
四、應(yīng)用領(lǐng)域
(一)生物成像
細(xì)胞成像
細(xì)胞內(nèi)吞與分泌研究:標(biāo)記細(xì)胞對大分子物質(zhì)的攝取和釋放過程。例如,將 TRITC-Dextran 加入細(xì)胞培養(yǎng)基,觀察細(xì)胞如何通過內(nèi)吞作用將其攝入,并研究內(nèi)吞途徑和調(diào)控機(jī)制。
細(xì)胞器標(biāo)記與定位:通過與特定細(xì)胞器靶向分子結(jié)合,TRITC-Dextran 可用于標(biāo)記細(xì)胞器,研究其在細(xì)胞內(nèi)的動態(tài)變化和相互作用。
組織成像
組織切片分析:用于組織切片的熒光染色,觀察組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞分布。例如,在研究腫瘤組織時(shí),TRITC-Dextran 可以標(biāo)記腫瘤血管,分析腫瘤的血供特點(diǎn)。
活體組織成像:在小動物模型中,TRITC-Dextran 可用于淺表組織(如皮膚、黏膜)的成像,研究組織的生理和病理變化。
(二)藥物遞送與載體研究
載體標(biāo)記與追蹤
藥物載體分布:在構(gòu)建基于葡聚糖的藥物遞送系統(tǒng)時(shí),TRITC-Dextran 可作為載體標(biāo)記物,追蹤載體在體內(nèi)的分布和代謝情況。例如,研究納米顆粒藥物載體在體內(nèi)的靶向性和滯留時(shí)間。
載體性能評估:通過熒光信號分析,評估藥物載體的穩(wěn)定性和釋放行為,優(yōu)化載體設(shè)計(jì)。
藥物釋放監(jiān)測
在體外模擬實(shí)驗(yàn)中,利用熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測藥物從載體中的釋放過程,繪制釋放曲線,分析釋放機(jī)制。
(三)血管與微循環(huán)研究
血管通透性研究
注射 TRITC-Dextran 后,通過熒光成像評估血管通透性變化,研究炎癥、腫瘤等疾病對血管屏障的影響。
微血管成像
高分辨率成像技術(shù)下,清晰觀察微血管形態(tài)、分支和血流情況,為微循環(huán)研究提供直觀數(shù)據(jù)支持。
三、合成方法
化學(xué)偶聯(lián)法
TRITC 活化:TRITC 染料通過異硫氰酸酯基團(tuán)與葡聚糖的羥基反應(yīng),形成穩(wěn)定共價(jià)鍵。
反應(yīng)條件優(yōu)化:需控制溫度(如 37℃)、pH 值(如弱堿性)和反應(yīng)時(shí)間(如數(shù)小時(shí)),以提高標(biāo)記效率和產(chǎn)物純度。
純化步驟
反應(yīng)結(jié)束后,通過透析(如 4℃、PBS 緩沖液)或離心除去雜質(zhì),獲得純凈的 TRITC-Dextran。
四、優(yōu)缺點(diǎn)分析
優(yōu)點(diǎn)
熒光特性優(yōu)越:橙紅色熒光易于觀察,信號強(qiáng)度高,適合顯微成像。
生物相容性好:葡聚糖基底降低毒性,適合生物醫(yī)學(xué)研究。
標(biāo)記效率高:化學(xué)偶聯(lián)法成熟,適合大規(guī)模制備。
缺點(diǎn)
組織穿透性有限:可見光區(qū)熒光在深層組織中穿透性差,不適合深層成像。
光穩(wěn)定性一般:長時(shí)間光照下可能發(fā)生光漂白,需控制成像時(shí)間。
背景熒光干擾:生物樣品中的自發(fā)熒光可能影響信號,需優(yōu)化成像參數(shù)(如使用濾光片減少干擾)。
四、應(yīng)用案例
細(xì)胞內(nèi)吞研究:將 TRITC-Dextran 標(biāo)記后觀察細(xì)胞對示蹤劑的內(nèi)吞過程,通過熒光顯微鏡觀察其在細(xì)胞內(nèi)的分布和動態(tài)變化,有助于理解細(xì)胞功能?!?/span>
血管通透性研究:
實(shí)驗(yàn)場景:在動物實(shí)驗(yàn)中,通過 TRITC-Dextran 標(biāo)記觀察血管通透性變化。
結(jié)果分析:若炎癥部位熒光信號增強(qiáng),說明血管通透性增加,為病理研究提供依據(jù)。
五、總結(jié)
TRITC-Dextran 作為一種重要的熒光標(biāo)記物,在生物成像、血管研究、藥物遞送系統(tǒng)研究等領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用價(jià)值。盡管存在組織穿透性有限、光穩(wěn)定性一般等不足,但通過優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件(如控制光照時(shí)間、使用濾光片減少背景干擾),可充分發(fā)揮其優(yōu)勢。未來,隨著熒光技術(shù)的進(jìn)步,TRITC-Dextran 的應(yīng)用場景將進(jìn)一步拓展。
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